纳豆激酶活性检测

纳豆激酶活性检测

纳豆激酶活性检测的重要性

纳豆激酶作为一种源自纳豆发酵过程的丝an酸蛋白酶，具有显著的溶栓活性和心血管保护作用，近年来在保健品和医药领域备受关注。根据SN/T 4536-2016《出口纳豆中纳豆激酶活性的测定 纤维蛋白平板法》要求，纳豆产品中纳豆激酶活性需达到 ≥2000 FU/g 的标准。这一指标不仅是衡量产品品质的核心参数，更是保障消费者健康功效的关键依据。

2024年中国保健品协会市场调查报告显示，国内纳豆激酶产品市场规模已达47亿元，但抽检合格率仅为78%，其中32%的不合格产品源于活性未达标。活性不足的产品不仅无法实现宣传的健康功效，还可能因工艺缺陷导致杂菌污染风险。因此，建立标准化的活性检测方法对行业规范发展至关重要。

纤维蛋白平板法检测原理

纤维蛋白平板法是测定纳豆激酶活性的国际通用方法，其原理基于酶促溶栓反应的可视化定量：

平板制备：将纤维蛋白原与凝xue酶混合，在琼脂糖凝胶中形成固态纤维蛋白基质

酶解反应：纳豆激酶通过水解纤维蛋白肽键，在平板上形成透明溶解圈

定量依据：溶解圈直径与酶活性在一定范围内呈正比例关系(R²≥0.99)，通过标准曲线计算样品活性

该方法具有 特异性强(仅对纤维蛋白有水解作用)、灵敏度高(zui低检出限达50 FU/g)、操作简便 等优势，被SN/T 4536-2016确定为仲裁方法。

注：图中展示纤维蛋白平板上不同浓度纳豆激酶形成的溶解圈，从左至右活性依次为500 FU/g、1000 FU/g、2000 FU/g、4000 FU/g

检测标准与方法依据

纳豆激酶活性检测严格遵循 SN/T 4536-2016 标准规范，关键技术参数包括：

标准同时规定，每个样品需做3次平行实验，相对标准偏差(RSD)应≤8%，确保检测结果的可靠性。

纤维蛋白平板法检测步骤

试剂配制

0.05 M Tris-HCl缓冲液（pH 7.8）

称取6.06 g Tris、8.77 g NaCl，用HCl调节pH至7.8.定容至1000 mL

121℃高压灭菌20分钟，4℃保存备用

纤维蛋白原溶液

取0.15 g纤维蛋白原溶于100 mL缓冲液，37℃水浴搅拌至wan全溶解

用0.45 μm滤膜过滤除菌，现配现用

凝xue酶溶液

用缓冲液将凝xue酶配制成100 U/mL母液，分装后-20℃冻存

使用前稀释至10 U/mL工作液

平板制备

称取1.2 g琼脂糖加入100 mL缓冲液，加热煮沸至完quan融化

降温至55℃时加入5 mL纤维蛋白原溶液，轻轻混匀

迅速加入0.5 mL凝xue酶溶液，立即倒入直径90 mm培养皿(约15 mL/皿)

水平放置30分钟待凝固，4℃预冷30分钟备用

样品处理与点样

样品提取

称取2.00 g纳豆样品，加入18 mL缓冲液

组织捣碎机匀浆2分钟(10000 rpm)

4℃静置提取30分钟，4000×g离心10分钟

取上清液经0.22 μm滤膜过滤，作为待测液

梯度稀释

将待测液用缓冲液稀释至100-4000 FU/g浓度范围

同时制备尿ji酶标准品系列(500、1000、2000、4000 FU/mL)

点样操作

用微量移液器取10 μL样品/标准品点样于平板表面

每个浓度做3次平行，点样间距≥2.5 cm

37℃温箱静置30分钟使样品扩散

培养与测量

将平板放入37℃恒温培养箱，培养18小时

取出后用游标卡尺测量溶解圈垂直方向直径(精确至0.01 mm)

以标准品活性为横坐标，溶解圈直径为纵坐标绘制标准曲线

按以下公式计算样品活性：

X = (D - a)/b

其中：

X：样品纳豆激酶活性(FU/g)

D：样品溶解圈平均直径(mm)

a、b：标准曲线截距和斜率

限liang要求与质量控制要点

活性判定标准

根据SN/T 4536-2016及相关产品标准：

出口级纳豆：活性≥2000 FU/g

功能性纳豆激酶制剂：活性≥10000 FU/g(按标示量)

普通食品级：活性≥1000 FU/g

2023年某电商平台抽检数据显示，宣称"高活性"的产品中，38%实际活性低于标签值的50%，凸显严格检测的必要性。

关键质控环节

标准曲线质量控制

相关系数R²必须≥0.99

标准品溶解圈直径变异系数应≤5%

平板均一性验证

每批次制备3块质控平板，同一样品溶解圈RSD应≤3%

边缘效应检查：边缘点样与中心点样直径差≤0.5 mm

干扰因素排除

若样品pH偏离7.0-8.0.需用1 M HCl/NaOH调节

高盐样品需透析处理(截留分子量10 kDa)

色素干扰可通过活性炭脱色(0.5%用量)

检测意义与应用前景

纳豆激酶活性检测不仅是 产品质量控制 的核心手段，更是 行业技术进步 的重要支撑：

保障消费者权益

通过科学检测数据验证产品功效，避免企业虚假宣传。2024年某知ming品牌因活性虚标被罚200万元，检测报告成为关键证据。

推动工艺优化

帮助企业监控发酵过程，如某企业通过检测发现37℃发酵72小时活性达峰值(2800 FU/g)，较传统工艺提升40%。

促进标准化发展

为制定纳豆激酶行业标准提供技术依据，目前我国正在制定的《纳豆及纳豆制品》国家标准已采纳该检测方法。

随着心脑血管疾病预防需求的增长，纳豆激酶市场将持续扩大。建立规范的活性检测体系，对促进行业健康发展、提升产品国际竞争力具有重要意义。建议企业将检测纳入生产全流程管控，第三方检测机构加强能力验证，共同守护消费者"血管健康"防线。